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9一种制备重组链激酶的方法

专利号:94112106.2

专利权人:上海医科大学

发明人:宋后燕

简介:本发明属生物技术方法。目前国外各公司用致病性溶血性链球菌作生产菌株,工艺复杂,成本高。本发明的目的是提供一种用生物高技术制备重组链激酶的方 法。其技术方案是(1)从人体口腔分离溶血性链球菌,从培养液中提纯链激酶,测定N末端和C末端5个氨基酸顺序作设计引物的参考。用溶血性链球菌大分子DNA作模板,通过PCR直接扩增链激酶基因,链激酶基因经核苷酸顺序分析证实后与原核表达载体例如含PL、PR启动子、 CIT857基因以及5SRNA终止信号的原核表达载体PLY-4质粒组成高效表达质粒PSTE-SK-1;(2) PSTE-SK-1转化大肠杆菌K802,用温度诱导γ-SK基因的表达,表达产物以包涵体形式存在于工程菌内;(3)通过发酵技术扩增工程菌,用温度诱导基因表达,发酸参数为温度28℃~42 ℃,氧溶量为50%~80%,pH6-8;(4)发酵后用高压破碎细菌,离心收集包涵体,包涵体经缓冲洗涤,盐酸胍溶解,和γ-SK的复性后,再用凝胶过滤,离子交换二步法纯化产品。用本发明方法所得产品的产量和纯度都很高。

  本发明在上海医科大学等单位实施,并在瑞士、俄罗斯申请专利,产品临床应用显示,治疗急性心肌梗塞时,溶栓效率高,不良反应低,能安全有效抢救患者生命。累计新增销售额14.70万元,新增利润1.2万元。