专利号：94112106.2
专利权人：上海医科大学
发明人：宋后燕
简介：本发明属生物技术方法。目前国外各公司用致病性溶血性链球菌作生产菌株，工艺复杂，成本高。本发明的目的是提供一种用生物高技术制备重组链激酶的方 法。其技术方案是(1)从人体口腔分离溶血性链球菌，从培养液中提纯链激酶，测定N末端和C末端5个氨基酸顺序作设计引物的参考。用溶血性链球菌大分子DNA作模板，通过PCR直接扩增链激酶基因，链激酶基因经核苷酸顺序分析证实后与原核表达载体例如含PL、PR启动子、 CIT857基因以及5SRNA终止信号的原核表达载体PLY-4质粒组成高效表达质粒PSTE-SK-1；(2) PSTE-SK-1转化大肠杆菌K802，用温度诱导γ-SK基因的表达，表达产物以包涵体形式存在于工程菌内；(3)通过发酵技术扩增工程菌，用温度诱导基因表达，发酸参数为温度28℃～42 ℃，氧溶量为50%～80%，pH6-8；(4)发酵后用高压破碎细菌，离心收集包涵体，包涵体经缓冲洗涤，盐酸胍溶解，和γ-SK的复性后，再用凝胶过滤，离子交换二步法纯化产品。用本发明方法所得产品的产量和纯度都很高。
本发明在上海医科大学等单位实施，并在瑞士、俄罗斯申请专利，产品临床应用显示，治疗急性心肌梗塞时，溶栓效率高，不良反应低，能安全有效抢救患者生命。累计新增销售额14.70万元，新增利润1.2万元。